品牌 SOLARBIO/索萊寶 貨號(hào) PC0020 規(guī)格 50T/10*50T 供貨周期 現(xiàn)貨 主要用途 BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒
Solarbio/ 索萊寶 PC0020 BCA
索萊寶 BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒-常備現(xiàn)貨
產(chǎn)品貨號(hào)：PC0020
產(chǎn)品名稱(chēng)：BCA 蛋白濃度測(cè)定試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格：50T/10*50T
產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
BCA Protein Assay Kit
具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的參數(shù)為準(zhǔn)
規(guī)格：50T(500 微孔) ; 10*50T （500 微孔）
儲(chǔ)存條件：BSA 附件-20 ℃，其它試劑RT ，有效期1 年
堿性條件下，蛋白將Cu2+ 還原為Cu+ ， Cu+ 與BCA 試劑形成紫藍(lán)色的絡(luò)合物，測(cè)定其在562nm 處的吸收值，并與標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)對(duì)比，即可計(jì)算待測(cè)蛋白的濃度。常用濃度的去垢劑SDS ，Triton X-100 ，Tween 不影響檢測(cè)結(jié)果，但受螯合劑(EDTA, EGTA) 、還原劑（DTT ，巰基乙醇）和脂類(lèi)的影響。實(shí)驗(yàn)中，若發(fā)現(xiàn)樣品稀釋液或裂解液本身背景值較高，可試用Bradford 蛋白濃度測(cè)定試劑盒。
一. 微孔酶標(biāo)儀法
1. 配制工作液：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品數(shù)量，按50 體積BCA 試劑加1 體積Cu 試劑（50:1 ）配制成BCA 工作液，充分混勻( 混合時(shí)可能會(huì)有渾濁，但混勻后就會(huì)消失) 。BCA 工作液室溫24 小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。
2. 稀釋標(biāo)準(zhǔn)品：取10 μL BSA 標(biāo)準(zhǔn)品用PBS 稀釋至100 μL （樣品一般可用PBS 稀釋?zhuān)?，使終濃度為0.5mg/mL 。將標(biāo)準(zhǔn)品按0, 2, 4, 6, 8, 12, 16, 20 μL 加到96 孔板的蛋白標(biāo)準(zhǔn)品孔中，加PBS 補(bǔ)足至20 μL 。
3. 將樣品作適當(dāng)稀釋?zhuān)ㄗ詈枚嘧鰩讉€(gè)梯度，如作2 倍、4 倍、8 倍稀釋?zhuān)?span>20 μL 到96 孔板的樣品孔中。由于移液器在取小量樣品時(shí)誤差偏大，標(biāo)準(zhǔn)線(xiàn)前面的點(diǎn)可能不很準(zhǔn)確，所以盡可能的讓樣品點(diǎn)落在標(biāo)準(zhǔn)線(xiàn)1/2 后。
4. 各孔加入200 μL BCA 工作液，37 ℃放置15-30 分鐘。用酶標(biāo)儀測(cè)定A562nm ，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算出蛋白濃度。使用溫箱孵育時(shí)，應(yīng)注意防止因水分蒸發(fā)影響檢測(cè)結(jié)果。
二. 分光光度計(jì)法 如沒(méi)有酶標(biāo)儀，可用分光光度計(jì)在離心管中混勻后加入比色皿中比色。 步驟如下：
1. 配制工作液: 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品數(shù)量，按50 體積BCA 試劑加1 體積Cu 試劑（50:1 ）配制成BCA 工作液，充分混勻( 混合時(shí)可能會(huì)有渾濁，但混勻后就會(huì)消失) 。BCA 工作液室溫24 小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。
2. 稀釋標(biāo)準(zhǔn)品：取100 μL BSA 標(biāo)準(zhǔn)品用PBS 稀釋至1mL （樣品一般可用PBS 稀釋?zhuān)?，使終濃度為0.5mg/mL 。
3. 取八支（或者更多）5mL 離心管，標(biāo)上號(hào)，按下表加入試劑。
離心管號(hào)
1
2
3
4
5
6
7 （樣品管1 ）
8 （樣品管2 ）
9 （樣品管3 ）
標(biāo)準(zhǔn)蛋白BSA
0
40μL
80μL
120μL
160μL
200μL
200μL 適當(dāng)稀釋的樣品1
200μL 適當(dāng)稀釋的樣品2
……
PBS
200μL
160μL
120μL
80μL
40μL
0
0
0
0
BCA 工作液
2ml
2ml
2ml
2ml
2ml
2ml
2ml
2ml
2ml
4.37 ℃放置15-30 分鐘。用分光光度計(jì)測(cè)562nm 處吸光值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算出蛋白濃度。
注意事項(xiàng)：
1. 長(zhǎng)期不用時(shí)，Cu 試劑與PBS 稀釋液可置于2-8 ℃保存，如發(fā)現(xiàn)細(xì)菌污染則應(yīng)丟棄。BCA 試劑在低溫條件下出現(xiàn)結(jié)晶沉淀時(shí)，可37 ℃溫育使其wan全溶解, 不影響使用。
2. 樣品中若含有較多干擾物質(zhì)時(shí)，請(qǐng)采用Bradford 蛋白濃度測(cè)定試劑盒。
3. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
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